Hoechst 33258，也称 bis Benzimide H 33258 或 HOE 33258，是一种非嵌入性的亮蓝色荧光染料。染料在溶液中荧光较弱，但在 AT 序列富集区域的小沟处与 DNA 结合后荧光变得明亮，故此类染料也被称为 DNA 探针。因背景较低，故染色细胞不需洗涤步骤，且染色非常稳定，对活细胞无毒，结合 DNA 染色后可持续几天或更长时间。Hoechst 33258 与 Hoechst 33342 相比在水中的溶解度要高，但两种染料均具有高细胞膜渗透性，被广泛用于细胞凋亡检测，染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。